JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:55 min. • July 8th, 2025
Prendi una piastra multipozzetto contenente cellule natural killer, o NK, e cellule tumorali. I pozzetti di controllo contengono solo cellule tumorali.
Centrifuga per facilitare il contatto cellulare.
incubare. I recettori attivanti sulle cellule NK si legano ai ligandi di superficie delle cellule tumorali, innescando le cellule NK a rilasciare granuli contenenti molecole citotossiche.
Queste molecole creano i pori della membrana delle cellule tumorali e inducono l'apoptosi rilasciando contenuti intracellulari, tra cui la lattato deidrogenasi o LDH.
Aggiungere un detergente per lisare le cellule tumorali nei pozzetti di controllo per il massimo rilascio di LDH.
Centrifugare e trasferire una parte dei surnatanti contenenti LDH in una piastra di analisi.
Aggiungere il reagente del test e incubare.
LDH converte il lattato in piruvato riducendo il NAD+. La diaforasi utilizza il NADH per ridurre il sale di tetrazolio, formando un prodotto formazanico di colore rosso.
Aggiungere una soluzione acida per fermare la reazione enzimatica.
Utilizzare un lettore di micropiastre per misurare l'assorbanza della formazan nei pozzetti.
L'intensità del formazan è proporzionale al numero di cellule t
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