JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:43 min. • July 8th, 2025
Inizia con una soluzione polimerica congelata contenente polimeri caricati positivamente.
Scongelare la soluzione polimerica fino a raggiungere la temperatura ambiente.
Aggiungere un tampone e un vortice per una miscelazione uniforme, generando una soluzione omogenea.
Introdurre l'mRNA bersaglio nella soluzione polimerica in un rapporto uguale per una reazione ottimale.
Incubare per consentire ai polimeri caricati positivamente di interagire con i gruppi fosfato caricati negativamente nell'mRNA tramite interazioni elettrostatiche.
Ciò facilita l'incorporazione dell'mRNA all'interno della struttura polimerica, formando nanoparticelle di complessi mRNA-polimero o poliplex.
Trasferire questi poliplex in una provetta contenente acqua priva di RNasi.
Mescolarli e lasciare precipitare i poliplex.
Introdurre un tampone contenente saccarosio e congelarlo. Il saccarosio agisce come crioprotettore che mantiene l'integrità strutturale dei poliplex.
Quindi, eseguire la liofilizzazione, per rimuovere eventuali tracce di acqua.
Conservalo a bassa temperatura come candidato vaccino a mRNA per un uso futuro.
Per la formazione di poliplessi, scongelare i polimeri precedentemente preparati peptidi C
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