JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:20 min. • July 8th, 2025
Inizia con una coltura di cellule staminali del midollo osseo.
Introdurre il tampone tripsina-EDTA per staccare le cellule e rompere i grumi cellulari, formando una sospensione a cellula singola.
Centrifugare, quindi rimuovere il surnatante. Risospendere il pellet con un mezzo nuovo.
Trasferire la sospensione in una siringa e collegarla a un'unità filtrante a membrana.
Spingere lo stantuffo ed eliminare il mezzo contenente filtrato.
Staccare il filtro. Riempia la siringa con un terreno fresco. Ricollegare il filtro e spingere rapidamente lo stantuffo.
La pressione del liquido spinge la cella verso i pori del filtro.
Questo produce una vescicola sferica della membrana plasmatica o PMV.
Queste vescicole contengono componenti cellulari e organelli circondati dalla membrana.
Esaminare il filtrato al microscopio a contrasto di fase invertito per osservare le vescicole sferiche traslucide.
Le dimensioni delle vescicole corrispondono alla dimensione dei pori della membrana filtrante, confermando la generazione di PMV.
Per generare le PMV, in primo luogo, le PMSC di topo di coltura in terreno di coltura DMEM completo in un pozzetto di una piastra a sei pozzetti in un incubatore umidificato
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