Generazione di neutrofili anti-angiogenici associati al tumore

Prendiamo un tumore del melanoma murino che comprende neutrofili associati al tumore, o TAN.

I TAN mostrano un'elevata attività dell'enzima nicotinamide fosforibosiltransferasi, o NAMPT, stimolando l'angiogenesi, la proliferazione dei vasi sanguigni nei tumori e facilitando la crescita tumorale.

Tritare il tessuto e aggiungere enzimi per degradare la matrice tissutale, allentando le cellule.

Filtrare la sospensione attraverso un colino e centrifugare per pellettare le cellule.

Aggiungere un tampone lisanti per lisare i globuli rossi, quindi centrifugare e scartare il surnatante contenente detriti cellulari.

Introdurre anticorpi per bloccare i recettori Fc cellulari, evitando così l'immunocolorazione non specifica.

Introdurre un cocktail di anticorpi marcati con fluorofori specifici per marcatori di superficie sui TAN e un colorante per discriminare le cellule morte.

Utilizzando il FACS, isolare i TAN vitali marcati con fluorofori e trasferirli su una micropiastra.

Aggiungere un inibitore che blocca l'attività NAMPT a pozzetti selezionati e incubare.

Utilizzare le cellule per valutare la loro capacità di stimolare l'angiogenesi. I TAN trattati con inibitori mostrano una ridotta angi