JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
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Iniziare con una sospensione di Mycobacterium bovis BCG, trattata con un tensioattivo non ionico, per prevenire l'aggregazione batterica.
Quindi, aggiungere un reagente di biotinilazione e incubare.
Questo reagente di biotinilazione, un complesso di biotina complessato in un linker funzionale, facilita il legame delle molecole di biotina alle proteine di superficie batteriche, marcando i batteri.
Dopo l'incubazione, centrifugare la sospensione batterica marcata con biotina per rimuovere il reagente di biotinilazione non reagito.
Risospendere i batteri in un tampone. Aggiungere una soluzione di proteina di fusione dell'avidina, una proteina ricombinante che comprende un dominio antigenico bersaglio fuso con l'avidina monomerica.
Durante l'incubazione, l'avidina si lega alla biotina, facilitando la modifica della superficie batterica con antigeni bersaglio.
Centrifugare la sospensione per rimuovere le proteine di fusione non legate.
Risospendere i batteri rivestiti di antigene in un tampone contenente un tensioattivo non ionico. Il rivestimento dell'antigene sui batteri può migliorare la sua proprietà di innescare risposte immunitarie.
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