Generazione di una coltura di neuroni primari a bassa densità da neuroni embrionali congelati

Inizia con un crioviale contenente neuroni embrionali crioconservati e posizionalo in un blocco riscaldante per uno scongelamento controllato.

Successivamente, trasferire i neuroni scongelati in un tubo e diluirli con un mezzo neurobasale goccia a goccia per bilanciare la pressione osmotica e prevenire la lisi cellulare.

Questo genera una sospensione omogenea con neuroni uniformemente dispersi.

Seminare la sospensione neurale diluita su una piastra multipozzetto rivestita di poli-L-lisina contenente un mezzo neurobasale arricchito con sostanze nutritive e antibiotici.

Incubare per consentire alla poli-L-lisina caricata positivamente di interagire con i neuroni tramite interazioni elettrostatiche, facilitandone l'aderenza.

Fornire ai pozzetti terreni neurobasali freschi.

Incubare le cellule nello stesso terreno in condizioni di umidità per evitare l'evaporazione del terreno.

I neuroni embrionali utilizzano i nutrienti e crescono sviluppando processi neuronali e formando neuroni primari.

Il mezzo neurobasale mantiene i neuroni primari che appaiono ampiamente distanziati, generando una coltura primaria a bassa densità con connessioni neuronali.

Iniziare rivestendo una micropiastra a 9