JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 5:51 min. • July 8th, 2025
Prendi un cervello di cucciolo di topo transgenico.
Rimuovi il cervelletto e seziona il cervello. Separare il tessuto cortico-ippocampale contenente neuroni eccitatori che esprimono proteine fluorescenti.
Trasferire il tessuto in una piastra di coltura contenente tampone.
Tritare il fazzoletto e trasferirlo in un tubo contenente papaina.
La papaina digerisce la matrice extracellulare del tessuto, allentando le cellule, compresi i neuroni.
Trasferire il tessuto digerito in una provetta con proteine BSA, arrestando l'attività enzimatica e prevenendo il danno cellulare.
Dissociare meccanicamente i tessuti, rilasciando le cellule.
Centrifugare e rimuovere il surnatante contenente detriti ed enzimi.
Risospendere le cellule in mezzi neuronali a bassa fluorescenza e filtrarle attraverso un colino cellulare, rimuovendo gli aggregati cellulari.
Eseguire lo smistamento cellulare attivato dalla fluorescenza per identificare e ordinare i neuroni fluorescenti.
Trasferire i neuroni ordinati in una provetta da microcentrifuga e centrifugare. Risospendere i neuroni nei mezzi neuronali.
Neuroni seme su vetrini coprioggetti rivestiti di poli-L-lisina in una piastra a più pozzetti. I neuroni aderisco
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