Generazione di neuroni simpatici postgangliari da cellule staminali pluripotenti umane

Prendere una micropiastra rivestita di matrice extracellulare e aggiungere cellule staminali pluripotenti umane sospese in un mezzo di differenziazione.

Il mezzo contiene molecole di segnalazione che influenzano le vie di segnalazione cellulare, dirigendo la differenziazione nelle cellule progenitrici neurali.

Introdurre un altro mezzo di differenziazione contenente molecole di segnalazione che inducono la differenziazione in cellule della cresta neurale, o NCC, precursori delle cellule neuronali e non neuronali.

Aggiungere enzimi per interrompere la matrice, dissociando così le cellule.

Lavare per neutralizzare gli enzimi, quindi centrifugare e scartare il surnatante. Risospendere gli NCC in un mezzo sferoidale e trasferirli su una micropiastra.

I fattori di crescita del mezzo e le piccole molecole inducono la formazione di sferoidi.

Integrare con acido retinoico, che favorisce la differenziazione in neuroni progenitori simpatici.

Trasferire lo sferoide su una micropiastra rivestita di proteine di adesione in un mezzo di maturazione del neurone simpatico, provocando l'adesione dello sferoide.

I fattori di crescita neurali e l'acido retinoico nel mezzo promuovono la maturazione in