Una tecnica di co-coltura per differenziare le cellule progenitrici neurali umane in neuroni

Prendi una coltura di cellule progenitrici neurali umane, o NPC, supportate su una matrice extracellulare.

Le NPC sono ingegnerizzate per esprimere una proteina fluorescente.

Eliminare il terreno e lavare le celle per rimuovere eventuali residui di terreno.

Incubare la coltura con enzimi che interrompono la matrice, dissociando le cellule.

Trasferire le cellule staccate in una provetta e aggiungere un mezzo per neutralizzare l'azione enzimatica.

Centrifugare per pellettare le cellule, scartare il surnatante e risospendere le NPC in un mezzo di differenziazione neuronale.

Trasferisci gli NPC su una co-coltura consolidata di astrociti di topo e neuroni corticali di ratto.

I fattori di crescita rilasciati dalla co-coltura stabilita, insieme ai contatti cellula-cellula delle NPC con i neuroni corticali e gli astrociti, promuovono la differenziazione delle NPC in neuroni maturi.

I neuroni maturi mostrano processi cellulari estesi e formano connessioni sinaptiche.

Sotto un microscopio confocale, utilizzare il segnale delle proteine fluorescenti per visualizzare i neuroni derivati da NPC umani.

Dopo aver generato cellule staminali pluripotenti indotte o iPSC, indurre e mantenere le cellul