Un metodo in vitro per generare organoidi cerebrali umani

Inizia con una coltura di neurosfere, gruppi fluttuanti di cellule progenitrici neuroepiteliali.

Trasferisci queste neurosfere su un foglio di inclusione.

Rimuovi i supporti. Aggiungere una goccia di matrice di membrana extracellulare contenente proteine e fattori di crescita a ciascuna neurosfera.

Incubare per solidificare la matrice, incorporando le neurosfere al suo interno.

Ora, trasferisci le neurosfere incorporate nella matrice utilizzando i terreni di neurosfera su una piastra di coltura contenente terreni di neurosfera.

incubare. La matrice di membrana extracellulare e i suoi costituenti facilitano la differenziazione delle cellule progenitrici neuroepiteliali in cellule neuroepiteliali che proliferano e formano lumi pieni di liquido.

Dopo l'incubazione, trasferire le neurosfere in un pallone rotante contenente terreni organoidi cerebrali preriscaldati. Incubare con agitazione per una maggiore diffusione dell'ossigeno e dei nutrienti, favorendo la crescita cellulare.

I fattori di crescita e gli inibitori di piccole molecole nei terreni promuovono la differenziazione neurale e si sviluppano in cellule di specifiche regioni cerebrali, formando organoidi cerebrali maturi.

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