Generazione di organoidi cerebrali derivati da cellule staminali pluripotenti indotte

Prendiamo colonie di cellule staminali pluripotenti indotte, o iPSC, coltivate su una matrice di supporto.

Aggiungere una soluzione contenente enzimi per dissociare le colonie in singole cellule.

Trasferire le cellule in una provetta, centrifugarle e scartare il surnatante.

Risospendere le iPSC in un mezzo di crescita.

Trasferire le cellule in una micropiastra contenente fibre polimeriche biocompatibili.

Centrifuga per aggregare forzatamente le iPSC, formando corpi embrioidi, o EB, sullo scaffold polimerico.

Transizione a un mezzo di induzione neurale che promuove la proliferazione e la differenziazione delle iPSC in cellule staminali neurali, cellule progenitrici e neuroni immaturi.

Dopo l'incubazione, le cellule subiscono l'auto-organizzazione.

Posizionare i corpi embrioidi su un foglio increspato e aggiungere gocce contenenti proteine della matrice extracellulare.

Incubare per solidificare la matrice, incorporando gli EB.

Trasferire gli EB in una micropiastra contenente un mezzo di mantenimento neurale. Incubare.

Gli EB subiscono una proliferazione cellulare per formare sporgenze e gemmazioni e differenziarsi in neuroni maturi, formando organoidi cerebrali.

Aspirare il terreno c