Una tecnica di co-coltura indiretta neurone-astrocita per lo studio delle interazioni neurone-glia

Iniziare con una piastra a più pozzetti contenente un inserto a membrana permeabile rivestito con poli-D-lisina.

Aggiungere il terreno di coltura degli astrociti al pozzetto e seminare gli astrociti, una cellula gliale specializzata, nell'inserto.

Incubare per consentire l'adesione cellulare sulla poli-D-lisina tramite interazioni elettrostatiche e formare un monostrato.

Sostituire il terreno degli astrociti con un terreno di coltura neuronale.

Trasferire questo inserto in una piastra multipozzetto contenente neuroni embrionali primari di topo aderenti su un vetrino coprioggetti rivestito di polimero.

Incubare per stabilire una co-coltura indiretta neurone-astrocita, in cui i due tipi di cellule sono fisicamente separati ma condividono lo stesso terreno di coltura.

Gli astrociti secernono vari fattori neurotrofici essenziali per la sopravvivenza e la crescita dei neuroni.

Questi fattori migrano attraverso il supporto permeabile e interagiscono con i neuroni primari. Questo favorisce la loro differenziazione e forma proiezioni neuronali.

Queste proiezioni si allungano e stabiliscono connessioni sinaptiche tra i neuroni, indicando interazioni neurone-glia.

Rivestire ogni inserto con