Sviluppo di sfere neuronali utilizzando una tecnica di coltura a goccia sospesa

Iniziare con una sospensione unicellulare di cellule progenitrici neuronali embrionali di topo in un mezzo neurobasale.

Il terreno contiene nutrienti essenziali per il mantenimento della vitalità cellulare.

Erogare piccole gocce di questa sospensione cellulare sul coperchio di un piatto di coltura non adesivo, assicurandosi che siano distanziate tra loro.

Capovolgere il coperchio, con conseguente formazione di gocce pendenti.

Posizionare il coperchio sopra la capsula contenente un tampone per creare un ambiente umido che impedisca l'evaporazione e l'incubazione del terreno.

All'interno delle gocce pendenti, la tensione superficiale del liquido mantiene la forma della goccia.

Questo confinamento della forma restringe le celle a uno spazio limitato senza diffondersi.

Inoltre, le forze gravitazionali all'interno delle gocce dirigono le cellule verso la regione inferiore.

Quando le cellule progenitrici neuronali entrano in contatto più stretto, si aggregano spontaneamente per formare una struttura tridimensionale nota come palla neuronale.

Per preparare le sfere neuronali, regolare la densità cellulare in questa sospensione cellulare a 1 milione di cellule per millilitro utilizzando il