Sviluppo di una cocoltura di neuroni e macrofagi in vitro

Inizia con i neuroni del ganglio della radice dorsale murina isolati in un mezzo di crescita.

Seminali su una piastra multipozzetto rivestita di polimero per favorire l'adesione neuronale.

Quindi, prendi un topo sezionato eutanasia e inietta PBS ghiacciato nella sua cavità peritoneale.

Massaggiare delicatamente il peritoneo per rimuovere i macrofagi dalla parete del peritoneo.

Spremere il topo per raccogliere il liquido peritoneale e trattarlo con un tampone di lisi per lisare selettivamente i globuli rossi, che appaiono come contaminanti. Centrifugare e risospendere le cellule in un terreno di coltura.

Trasferire i macrofagi in un inserto poroso posizionato all'interno del pozzetto contenente i neuroni in coltura.

Questa co-coltura consente ai neuroni e ai macrofagi di essere in stretta vicinanza.

Trattare la co-coltura con db-cAMP e incubare per facilitarne l'ingresso nelle cellule. Questo attiva i neuroni per secernere le molecole di segnalazione.

Queste molecole di segnalazione, insieme al db-cAMP, inducono i macrofagi ad adottare un fenotipo pro-rigenerativo e secernono fattori essenziali per la crescita neuronale.

Prima di impostare la coltura, rivestire una piastra a 6 pozze