Utilizzo di un mezzo condizionato con macrofagi per promuovere le estensioni neuronali

Inizia con l'adenosina monofosfato ciclico, o cAMP, una molecola di segnalazione che regola varie funzioni cellulari. Aggiungere il cAMP a una co-coltura neurone-macrofagi.

Le molecole di cAMP del terreno e i fattori di crescita dei neuroni innescano l'attivazione dei macrofagi.

Trasferire l'inserto con i macrofagi attivati in un altro pozzetto contenente un terreno di coltura per macrofagi.

Qui, i macrofagi rilasciano citochine e chemochine nel mezzo, formando un mezzo condizionato o CM.

Centrifugare il CM per pellettare i componenti cellulari.

Trasferire il surnatante e il filtro per rimuovere i detriti cellulari.

Aggiungere il CM raccolto a una coltura neuronale. Le citochine e le chemochine nel CM raccolto promuovono le estensioni dei neuroni.

Aggiungere paraformaldeide raffreddata per fissare le cellule.

Aggiungere un tampone di blocco per evitare il legame non specifico degli anticorpi. Lavare per rimuovere il tampone residuo.

Applicare anticorpi primari che hanno come bersaglio le proteine del citoscheletro dei neuroni. Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati.

Aggiungere anticorpi secondari coniugati con fluoroforo rosso che si legano agli anticorpi primari. Lavare per