Monitoraggio del trasporto assonale degli organelli nei motoneuroni utilizzando un dispositivo microfluidico

Inizia con una camera microfluidica rivestita di polimero con pozzetti prossimali e distali collegati tramite più microscanalature.

Nel pozzetto prossimale, posizionare i tessuti embrionali del midollo spinale di topo ricchi di motoneuroni in via di sviluppo.

Integra bene questo con un mezzo nutritivo. Incubare per consentire la crescita dei neuroni e l'aderenza alla superficie rivestita di polimero.

Successivamente, aggiungi un mezzo nutritivo privo di fattore di crescita al pozzetto prossimale.

Nei pozzetti distali, aggiungere un volume maggiore di terreno nutritivo contenente fattori di crescita per creare differenze di concentrazione e volume.

Queste differenze fanno sì che gli assoni, le proiezioni neuronali più lunghe, crescano verso i pozzetti distali attraverso i microsolchi.

Aggiungere una soluzione colorante fluorescente in entrambi i pozzetti.

Le molecole di colorante entrano nei neuroni e colorano i mitocondri e gli organelli acidi ad entrambe le estremità.

Nell'imaging confocale dal vivo, gli organelli colorati in fluorescenza si muovono in entrambe le direzioni tra i corpi cellulari neurali e gli assoni, confermando il trasporto assonale nei motoneuroni.

Smaltire tutt