Coltura di neuroni murini primari compartimentati utilizzando chip microfluidici in plastica
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:53 min. • July 8th, 2025
Prendiamo un chip microfluidico di plastica comprendente serbatoi somatici e compartimenti, nonché serbatoi assonali e compartimenti, collegati da microscanalature.
Aggiungere una soluzione di pre-rivestimento per saturare gli scomparti e le scanalature, prevenendo l'intrappolamento di bolle d'aria.
Aspirare la soluzione, lasciando pieni gli scomparti principali. Lavare con tampone.
Rivestire i pozzetti con un polimero sintetico che facilita l'adesione neuronale. Lavare con tampone e aggiungere terreni di coltura per evitare che il chip si secchi.
Per seminare una sospensione di neuroni dell'ippocampo di ratto, aspirare il terreno.
Caricare la sospensione nei serbatoi somatici. I neuroni entrano e si attaccano al compartimento somatico.
Aggiungere terreni di coltura neuronale ai pozzetti e incubare. I fattori di crescita presenti nei terreni facilitano la crescita neuronale.
A poco a poco, i neuroni estendono i loro assoni, che crescono nel compartimento assonale attraverso i microsolchi.
La ristrettezza dei solchi impedisce l'ingresso dei corpi cellulari neuronali, garantendo la separazione fisica delle regioni somatiche e assonali.
Per iniziare, metti un chip multiscomparto steri
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