JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:35 min. • July 8th, 2025
Inizia con un segmento dell'orecchio interno di topo sezionato contenente il ganglio spirale e l'organo di Corti, strutture specializzate dell'orecchio interno.
L'organo di Corti contiene cellule ciliate che fungono da recettori per i segnali uditivi.
Il ganglio a spirale è costituito da corpi cellulari neuronali che estendono i processi per innervare le cellule ciliate dell'organo di Corti.
Separare il ganglio spirale dall'organo di Corti e ricavarne piccole sezioni di tessuto o espianti.
Ora, prendete un array di multielettrodi rivestito di matrice extracellulare contenente terreni di coltura.
Posizionare gli espianti sull'array e posizionare l'organo di Corti all'esterno dell'area dell'elettrodo. Incubare.
Gli espianti si attaccano alla superficie multielettrodo rivestita.
Aggiungere regolarmente terreni contenenti proteine sieriche e fattori di crescita.
Durante la coltura, i componenti del terreno e l'organo di Corti forniscono un supporto neurotrofico, promuovendo la crescita dei neuriti dai neuroni gangliari a spirale rispetto al multielettrodo.
Separare l'organo di Corti dal ganglio a spirale in modiolo tenendo la porzione basale del ganglio a spirale e l'organo di Corti con una pinza e svolgendo lentamente l'organo di Corti dalla base all'apice. Quindi, tagliare gli espianti laterali dal ganglio a spirale usando una pinza o forbici o coltelli da microdissezione fine.
Ora, trasferire gli espianti di ganglio spirale e l'organo di Corti sul MEA. Quindi, posizionare gli espianti SG sull'area dell'elettrodo e sull'organo di Corti, a circa 5 millimetri di distanza dall'area dell'elettrodo. Posizionare gli espianti e l'organo di Corti sui MEA evitando danni al tessuto. Successivamente, posizionare con cura i MEA nell'incubatore e nella coltura a 37 gradi Celsius e 5% di CO2.
Il giorno successivo, ispezionare visivamente gli espianti per verificarne l'attaccamento ai MEA. Quindi, aggiungere 100 microlitri di terreno di coltura contenente il 10% di FBS e BDNF al giorno per cinque giorni consecutivi. Il giorno 6, aggiungere 2 millilitri di terreno di coltura, contenente il 10% di FBS e 5 nanogrammi per millilitro di BDNF, e coltivare il tessuto per altri 13 giorni.