Generazione di colture cellulari primarie di ganglio retinico da embrioni di zebrafish

Inizia con embrioni di pesce zebra in fase iniziale di sviluppo in terreni embrionali.

Rimuovere il corion, la membrana protettiva che circonda gli embrioni, e trasferire gli embrioni in una piastra di coltura fresca contenente terreni.

Rimuovere la parte della coda dell'embrione, quindi separare la testa e staccare delicatamente gli occhi dalla testa.

Gli occhi contengono la retina, un sottile strato di tessuto che ospita le cellule gangliari retiniche.

Trasferire gli occhi in una provetta contenente terreni di coltura cellulare di pesce zebra.

Dissociare meccanicamente gli occhi per rilasciare le cellule gangliari retiniche e formare una sospensione unicellulare.

Prelevare i vetrini coprioggetti posti in una piastra di coltura contenente terreni di coltura di pesce zebra.

I vetrini coprioggetti sono rivestiti con un polimero sintetico e una proteina di adesione.

Trasferire le cellule al centro del vetrino coprioggetti e incubare.

Le cellule gangliari retiniche si attaccano alle superfici rivestite e, inoltre, queste cellule sviluppano lunghe proiezioni chiamate assoni.

Recupera gli embrioni di zebrafish dall'incubatrice e immergi gli embrioni in una piastra di coltura tissutale d