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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 1:56 min • July 8th, 2025
Inizia con una piastra multipozzetto rivestita con una matrice di membrana basale che include polimeri extracellulari e proteine di adesione.
Seminare i pozzetti con una sospensione unicellulare di cellule staminali embrionali umane in un terreno di crescita contenente un inibitore della Rho-chinasi.
Incubare per consentire l'adesione delle cellule staminali alla matrice.
Le cellule assorbono l'inibitore, che blocca gli enzimi Rho-chinasi e previene la morte cellulare apoptotica.
Questo favorisce la sopravvivenza delle cellule e le mantiene in uno stato indifferenziato.
Sostituisci il terreno di coltura con un mezzo di induzione neurale ricco di fattori di crescita e contenente inibitori che hanno come bersaglio specifici recettori ALK.
Questi inibitori interagiscono con i loro recettori e bloccano le vie di segnalazione BMP e TGF-β, impedendo la differenziazione cellulare in precursori endodermici o mesodermici.
Ciò porta alla differenziazione selettiva delle cellule staminali in precursori ectodermici.
Questi precursori ectodermici utilizzano i nutrienti e i fattori di crescita del terreno per moltiplicarsi e successivamente differenziarsi in cellule progenitrici neurali.
Piastra le cellule su una piastra a 6 pozzetti rivestita con matrice di membrana basale a una densità di 2 x 105 cellule per pozzetto in 2 millilitri di mTeSR1 con inibitore ROCK a 10 micromolari. Dopo 24 ore, sostituire il terreno di coltura con un terreno di induzione neurale integrato con 1 dorsomorfina micromolare e 5 SB431542 micromolari. Cambiare il mezzo a giorni alterni durante i primi quattro giorni di induzione neurale, poi ogni giorno, fino a raggiungere la confluenza al settimo giorno.