Isolamento e coltura di microglia da cervelli di ratto utilizzando terreni privi di siero
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 8:59 min. • July 8th, 2025
Prendete un cervello di ratto perfuso. Tritarlo in piccoli frammenti.
Omogeneizzare il tessuto in un tampone per rilasciare le cellule, compresa la microglia.
Una volta che il tessuto non digerito si è depositato, raccogliere il surnatante contenente le cellule e aggiungere un tampone di separazione della mielina.
Mescolare il contenuto e centrifugare per separare le cellule dalla mielina e dai detriti. Rimuovere lo strato di detriti di mielina e il surnatante.
Risospendere le cellule nel tampone e nella pipetta per separare i grumi.
Passare la sospensione attraverso un colino per rimuovere gli aggregati cellulari rimanenti.
Trasferire le cellule filtrate in una piastra di coltura rivestita con anticorpi monoclonali specifici per la microglia. Incubare per facilitare l'adesione della microglia.
Lavare con tampone per rimuovere le cellule non aderenti. Aggiungere la tripsina e incubare per sciogliere la microglia.
Rimuovere la tripsina.
Aggiungere terreni privi di siero. Incubare su ghiaccio per indebolire le interazioni cellula-substrato.
Pipettare e raccogliere la sospensione in una provetta. Centrifugare e rimuovere il surnatante.
Risospendere la microglia in un terreno privo di
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