Isolamento e coltura di cellule staminali neurali adulte dalla zona sottocallosa del topo
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 5:31 min. • July 8th, 2025
Inizia con un cervello di topo su una matrice cerebrale raffreddata.
Ottieni sezioni contenenti la zona sottocallosa o SCZ. Trasferire la sezione in un tampone fosfato freddo.
Sotto un microscopio da dissezione, ritagliare la parte SCZ.
Taglia l'SCZ sezionato in pezzi più piccoli.
Trasferisci questi pezzi in un tampone per la digestione. Incubare per dissociare le cellule dal tessuto.
Centrifugare ed eliminare il surnatante. Risospendere le cellule in un mezzo adatto.
Trasferire le cellule su una piastra di coltura e aggiungere fattori di crescita specifici.
Le cellule staminali neurali adulte si dividono, formando gruppi chiamati neurosfere.
Una distribuzione impropria dei nutrienti nei gruppi cellulari limita la crescita cellulare.
Per disperdere i grappoli, centrifugare e scartare il surnatante. Risospendere i cluster in un buffer di dissociazione e incubarli.
Pipettare la soluzione su e giù per generare singole cellule.
Centrifugare ed eliminare il surnatante.
Risospendere le cellule e trasferirle in un mezzo adatto per ottenere un monostrato.
Una volta sezionato, trasferire il cervello del topo in un tampone PBS freddo e sciacquarlo due volte per rimuovere il sangue in eccesso
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