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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 1:44 min • July 8th, 2025
Prelevare una piastra di coltura rivestita con un substrato di coltura cellulare per facilitare l'adesione cellulare.
Il piatto contiene un inserto di coltura a un pozzetto senza una base attaccata al centro, creando uno scomparto definito. Il contorno di questo scomparto è segnato sulla piastra per osservare la migrazione cellulare.
Introdurre una sospensione cellulare nel compartimento che contiene le cellule endoteliali periventricolari o PVEC, le cellule che rivestono i vasi sanguigni nel cervello e gli interneuroni che migrano lungo i PVEC durante lo sviluppo del cervello.
Aggiungere un terreno di co-coltura alla piastra per mantenere l'umidità e incubare per facilitare l'adesione delle cellule al substrato.
Rimuovere l'inserto per eliminare la barriera fisica; rinfrescare il terreno e incubare nuovamente.
I PVEC proliferano, espandendo la rete di cellule endoteliali oltre il limite dell'inserto.
I PVEC secernono fattori che fungono da segnali di orientamento, dirigendo gli interneuroni a migrare lungo la rete PVEC.
La co-coltura che mostra la migrazione degli interneuroni è pronta per l'analisi.
Per eseguire il test di co-coltura, sospendere 30.000 interneuroni GABAergici e 30.000 cellule endoteliali periventricolari umane in 70 microlitri di terreno di co-coltura. Quindi, seminare questa soluzione cellulare all'interno di uno scomparto con inserto a un pozzetto. Dopo 48 ore, rimuovere l'inserto. Incubare la co-coltura a 37 gradi Celsius e al 5% di anidride carbonica per cinque giorni.