Generazione di organoidi cerebellari maturi da cellule staminali pluripotenti indotte utilizzando bioreattori monouso

Seminare cellule staminali pluripotenti indotte umane, o iPSC, in un bioreattore. Le iPSC vengono risospese in un terreno contenente un inibitore dell'apoptosi cellulare.

Sotto un campo magnetico, la ruota verticale del bioreattore ruota a una velocità controllata, facilitando il contatto cellula-cellula e la formazione dell'aggregato. Rimuovere la maggior parte del terreno e aggiungere nuovi terreni senza l'inibitore.

Continua a coltivare. Una volta che gli aggregati raggiungono una dimensione ottimale, lasciarli sedimentare per gravità. Rimuovere il mezzo.

Aggiungere i terreni di differenziazione contenenti fattori di crescita e la coltura con una velocità ridotta della ruota del bioreattore. I fattori di crescita promuovono la differenziazione neurale all'interno degli aggregati.

Successivamente, aggiungere un terreno fresco integrato con fattori di crescita e chemochine che inducono lo sviluppo di progenitori cerebellari.

Gradualmente, i progenitori cerebellari si organizzano in strati distinti all'interno degli aggregati, formando organoidi cerebellari precoci.

Infine, aggiungere un mezzo neuronale contenente specifici fattori neurotrofici.

Questi fattori inducono la maturazio