JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 6:18 min. • July 8th, 2025
Prendete un cervello di topo perfuso contenente un tumore.
La fase di perfusione rimuove le cellule immunitarie circolanti ma mantiene le cellule infiltrate nel tumore.
Isolare il tessuto contenente il tumore.
Ora, dissociare meccanicamente il tessuto.
La forza meccanica allenta il tessuto, liberando le cellule.
Trasferire il tessuto dissociato in una provetta.
Centrifugare ed eliminare il surnatante contenente detriti.
Risospendere il tessuto in una soluzione digestiva contenente collagenasi e DNasi.
La collagenasi degrada la matrice extracellulare, liberando le cellule. La DNasi degrada il DNA contaminante.
Aggiungere un tampone per fermare l'attività enzimatica.
Filtrare la sospensione per rimuovere gli aggregati cellulari e ottenere una sospensione a cellula singola.
Centrifugare ed eliminare il surnatante.
Risospendere le cellule in un mezzo gradiente ad alta densità. Ora, sovrapponi con un mezzo di gradiente a densità inferiore, formando un gradiente di separazione con un'interfaccia chiara.
Centrifugare per separare gli strati. Le cellule immunitarie si riuniscono all'interfaccia tra i mezzi di gradiente mentre i detriti cellulari galleggiano in cima.
Raccogli le cellule imm
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