Differenziazione di cellule staminali pluripotenti umane non transgeniche e transgeniche in cellule progenitrici neurali

Prelevare una piastra multipozzetto rivestita con una matrice extracellulare o ECM.

In pozzetti separati, introdurre cellule staminali pluripotenti umane non transgeniche e transgeniche, o hPSC, in un terreno di coltura.

Le hPSC transgeniche trasportano un transgene sotto un promotore inducibile da antibiotici. Il transgene codifica per un fattore di trascrizione che induce la differenziazione neurale.

Incubare per facilitare l'adesione delle cellule alla MEC. Piccole molecole nel mezzo prevengono l'apoptosi, promuovendo la proliferazione cellulare.

Aggiungere una soluzione di distacco per dissociare le cellule, aggiungere il terreno per fermare la dissociazione e quindi trasferirle su un'altra micropiastra rivestita di ECM per consentire la proliferazione cellulare.

Introdurre un mezzo di differenziazione neurale contenente piccole molecole sulle cellule non transgeniche e l'antibiotico induttore sulle cellule transgeniche.

Le piccole molecole inducono le cellule non transgeniche a differenziarsi in cellule progenitrici neurali o NPC. Nelle cellule transgeniche, l'espressione indotta dagli antibiotici del fattore di trascrizione attiva i geni necessari per la differenziazione in N