Generazione di cellule simili a cellule di Schwann da cellule stromali del midollo osseo
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
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Inizia con una coltura aderente di cellule stromali del midollo osseo.
Sottoporre le cellule all'ipossia, una condizione caratterizzata da ridotti livelli di ossigeno, per la durata richiesta.
Isolare le cellule precondizionate dall'ipossia, quindi centrifugare e rimuovere il surnatante. Risospendere le cellule nei mezzi progenitori neuronali contenenti fattori di crescita neuronali.
Trasferire le cellule in una piastra di coltura a basso attaccamento e incubarle.
Il precondizionamento dell'ipossia e i fattori di crescita neuronale inducono la differenziazione delle cellule stromali nei progenitori neuronali.
La superficie della placca a basso attaccamento mantiene i progenitori in sospensione, facilitandone la proliferazione e l'aggregazione in neurosfere tridimensionali.
Raccogliere le neurosfere, centrifugare e rimuovere il surnatante. Risospendere le cellule in terreni di induzione gliale contenenti fattori di crescita specifici per la glia.
Trasferire le neurosfere in una piastra di coltura rivestita con laminina, un componente della matrice extracellulare, e poli-D-lisina, un polimero sintetico caricato positivamente.
La superficie rivestita favorisce l'adesione cellulare, fa
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