Isolamento di neuroni DRG e cocoltura con precursori cellulari di Schwann per generare cellule di Schwann

Prendi il midollo spinale di un embrione di ratto con gangli della radice dorsale attaccati, o DRG, contenenti neuroni e cellule gliali.

Staccare i singoli DRG dal cavo, trasferirli in una provetta e centrifugare, scartando eventuali detriti di tessuto.

Aggiungere enzimi per dissociare i neuroni DRG e le cellule gliali.

Gira le celle e rimuovi eventuali detriti. Aggiungere un terreno di mantenimento neuronale e triturare per generare una sospensione a cellula singola.

Trasferire la sospensione in una micropiastra rivestita con un substrato di coltura, favorendo l'adesione cellulare.

Introdurre un terreno di purificazione e incubare. Gli agenti inibitori del mezzo eliminano le cellule gliali in divisione mentre i neuroni che non si dividono sopravvivono.

Prendi le cellule simili alle cellule di Schwann, o SCLC, in un terreno di co-coltura. Le SCLC, il precursore delle cellule di Schwann, interagiscono con i neuroni dei nervi periferici embrionali.

Introdurre la sospensione sui neuroni DRG e incubare. L'interazione degli SCLC con i neuroni DRG promuove la loro maturazione in cellule di Schwann.

Le celle di Schwann generate sono pronte per l'analisi.

Per raccogliere i gangli della rad