Replating di neuroni differenziati derivati da cellule staminali pluripotenti umane

Inizia con una grande piastra di coltura contenente neuroni differenziati derivati da cellule staminali pluripotenti umane con una fitta rete neuronale.

Incubare questi neuroni con lievi enzimi proteolitici per staccarli dalla piastra, sollevandoli come un foglio.

Con l'incubazione continua, gli enzimi interrompono parzialmente le connessioni cellulari, allentando le reti neuronali.

Aggiungere un terreno di coltura per fermare l'attività enzimatica.

Pipettare ripetutamente i neuroni staccati per separarli l'uno dall'altro.

Filtra i neuroni attraverso un colino cellulare per rimuovere i grumi di cellule e raccogliere i singoli neuroni.

Centrifugare e rimuovere il surnatante. Risospendili in un mezzo di crescita.

Per il replating, seminare questi neuroni su un polimero e una piastra multipozzetto rivestita di proteine di adesione. Incubare per consentire il loro attaccamento.

I neuroni utilizzano i nutrienti del mezzo per rimanere vitali. Sostituire regolarmente il terreno di coltura per mantenere i livelli di nutrienti.

Incubare ulteriormente per consentire la maturazione neuronale e la formazione di connessioni tra di loro.

Inizia risciacquando delicatamente la piastra di neuroni d