Generazione di precursori corticali di interneuroni da cellule staminali embrionali di topo

Prendiamo le cellule staminali embrionali di topo sospese in terreni privi di siero contenenti inibitori di piccole molecole.

Seminare le cellule su una piastra di coltura non aderente, consentendo loro di proliferare e aggregarsi per formare corpi embrioidi tridimensionali o EB.

Inoltre, gli inibitori bloccano le vie di segnalazione non neuronali e inducono la differenziazione delle cellule staminali embrionali verso un destino neurale corticale.

Trasferire gli EB in una provetta, centrifugare e rimuovere il surnatante.

Risospendere gli EB in una soluzione contenente un cocktail enzimatico e DNasi.

Gli enzimi dissociano gli EB in singole cellule, mentre la DNasi degrada il DNA contaminante.

Aggiungere terreni privi di siero contenenti inibitori per arrestare l'attività enzimatica, quindi centrifugare e rimuovere il surnatante contenente enzimi.

Risospendere le cellule in terreni contenenti inibitori di piccole molecole e trasferirle su piastre di coltura rivestite con fattori di adesione.

Le celle si attaccano alla superficie della piastra rivestita.

Gli inibitori prevengono la morte cellulare apoptotica e inducono la differenziazione cellulare nei progenitori degli interneuroni c