Generazione di progenitori neurali da cellule staminali embrionali di topo con il metodo della goccia sospesa

Prendi una sospensione di cellule staminali embrionali di topo.

Centrifugare, rimuovere il surnatante e risospendere le cellule in un mezzo di differenziazione neurale.

Posizionare le goccioline della sospensione sul lato interno del coperchio di una piastra di coltura.

Aggiungere un tampone alla piastra inferiore per evitare che le goccioline si secchino. Posizionare il coperchio sulla piastra inferiore, formando una coltura a goccia pendente, e incubare.

A causa della gravità, le cellule si raggruppano e formano aggregati tridimensionali chiamati corpi embrioidi o EB.

Posizionare le goccioline in una piastra contenente il mezzo di differenziazione e incubare sotto agitazione per la crescita degli EB.

Centrifugare e rimuovere il terreno; risospendere gli EB nel terreno di differenziazione integrato con acido retinoico, trasferirli in una piastra di coltura e incubarli.

L'acido retinoico entra nelle cellule e innesca la formazione di un complesso di trascrizione. Il complesso induce l'espressione genica, innescando la differenziazione in cellule progenitrici neurali.

Gli EB differenziati sono pronti per le applicazioni a valle.

Inizia impostando la coltura cellulare a goccia sospes