Generazione di una coltura neuronale a bassissima densità utilizzando uno strato di alimentazione neuronale ad alta densità
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:03 min. • July 8th, 2025
Iniziare con due piastre a più pozzetti: una con un fondo inciso rivestito con un polimero e l'altra con un vetrino coprioggetti rivestito in polimero.
Seminare una sospensione ad alta densità dei neuroni embrionali nella piastra con il fondo inciso. Aggiungere una sospensione neuronale a bassissima densità al vetrino coprioggetti contenente pozzetto.
Incubare per consentire l'adesione neuronale ai polimeri.
Rimuovere il vetrino coprioggetti e posizionarlo sopra la coltura di neuroni ad alta densità, consentendo ai neuroni di guardarsi l'un l'altro.
La superficie incisa con strutture elevate crea un micro-spazio che separa neuroni di diversa densità.
La coltura ad alta densità funge da strato di alimentazione e secerne il fattore di crescita neurale.
A causa dello spazio di diffusione ristretto, i fattori di crescita si accumulano intorno ai neuroni, facilitando la loro crescita e lo sviluppo di proiezioni neuronali.
Introdurre un terreno neurobasale con citosina arabinoside che inibisce selettivamente la crescita delle cellule non neuronali.
Reintegrare regolarmente con un terreno neurobasale fresco per mantenere la coltura neuronale.
In questa procedura, posizionare piastre a 24
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