Generazione di neuroni riprogrammando le cellule dei fibroblasti dermici umani

Introdurre fibroblasti dermici umani adulti o aHDF, sospesi in un mezzo di fibroblasto, in una micropiastra rivestita di proteine della matrice extracellulare. Incubare per consentire l'adesione cellulare.

Introdurre un vettore lentivirale transgenico. Dopo l'internalizzazione nella cellula ospite, l'RNA virale viene trascritto inversamente in DNA, che si integra nel genoma ospite.

Il DNA virale esprime fattori di trascrizione e RNA a forcina corta, o shRNA. Le nucleasi cellulari trasformano gli shRNA in piccoli RNA interferenti o siRNA.

I siRNA generati degradano l'mRNA codificante i repressori trascrizionali, inibendo così la loro espressione e consentendo l'attivazione dei geni di differenziazione neuronale.

I fattori di trascrizione attivano i geni, promuovendo la differenziazione neuronale degli aHDF.

Rimuovere il mezzo contenente i vettori non internalizzati.

Aggiungere un mezzo di conversione neuronale precoce contenente fattori di crescita e piccole molecole che inducono la differenziazione in cellule simili ai neuroni.

Sostituire il terreno con un mezzo di conversione neuronale tardiva contenente fattori neurotrofici per la maturazione in neuroni.

I neuroni maturi sono pro