JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 5:12 min. • July 8th, 2025
Inizia con un cervello di cucciolo di topo.
Isolare il cervelletto e ottenere fette di tessuto di spessore adeguato.
Trasferire le fette su inserti a membrana posizionati all'interno di pozzetti della piastra di coltura contenenti terreni.
Nei pozzetti trattati, il terreno contiene un composto di prova neuroprotettivo. I pozzi di controllo mancano del composto. Incubare.
In condizioni di controllo, le cellule cerebellari di Purkinje vanno incontro ad apoptosi, imitando lo sviluppo postnatale precoce in vivo.
Nei pozzetti trattati, a seconda del suo potenziale, il composto può proteggere le cellule dall'apoptosi.
Lavate le fette e fissatele per preservarne l'integrità cellulare.
Trasferire le fette in una soluzione che blocca la permeabilizzazione per permeabilizzare le membrane cellulari e bloccare i siti di legame non specifici.
Sovrapposizione con anticorpi primari che hanno come bersaglio una proteina legante il calcio specificamente espressa nelle cellule di Purkinje.
Lavare e introdurre anticorpi secondari coniugati con fluorofori che hanno come bersaglio gli anticorpi primari.
Controcolorare i nuclei con un colorante legante il DNA e montare le fette.
Utilizzando un microscop
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