Dissociazione e coltura di neuroni da campioni di tessuto ippocampale

Inizia con campioni di tessuto ippocampale contenenti neuroni e varie cellule non neuronali.

Aggiungere una soluzione enzimatica di proteasi. L'enzima degrada la matrice extracellulare del tessuto, avviando la dissociazione cellulare.

Lavare con un mezzo di placcatura per rimuovere gli enzimi residui.

Pipettare ripetutamente il tessuto digerito per dissociare meccanicamente le cellule dal tessuto, formando una sospensione unicellulare.

Centrifugare e rimuovere il surnatante. Risospendere le celle nel mezzo di placcatura.

Seminare le cellule su un vetrino coprioggetti rivestito di poli-D-lisina in una piastra a più pozzetti. La lisina migliora l'attaccamento cellulare.

Sostituire il mezzo di placcatura con un mezzo di mantenimento dei neuroni contenente nutrienti essenziali per la sopravvivenza dei neuroni.

Rinfrescare metà del terreno con terreno di mantenimento contenente arabinosilcitosina o Ara-C.

L'Ara-C entra nelle cellule e inibisce selettivamente la crescita delle cellule non neuronali, portandone alla morte.

Sostituisci i supporti con nuovi terreni di manutenzione per supportare la sopravvivenza dei neuroni.

Per dissociare i neuroni dell'ippocampo per la coltura, scongelare