JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
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Iniziare con colonie di cellule staminali pluripotenti indotte umane coltivate su una matrice di membrana basale aderente.
Aggiungere un mezzo di differenziazione cerebellare contenente un ormone specifico, un fattore di crescita e inibitori di piccole molecole.
Sollevare le colonie con una pipetta di vetro e trasferirle su una piastra di fissaggio ultrabassa.
La superficie a basso attaccamento mantiene le cellule in sospensione, facilitando la loro aggregazione in corpi embrioidi tridimensionali, o EB.
L'ormone, il fattore di crescita e gli inibitori si legano ai rispettivi siti bersaglio, promuovendo la differenziazione delle cellule staminali in progenitori neuronali.
Trasferire gli EB in pozzetti su piastre di coltura rivestite con un polimero sintetico e una proteina di adesione per facilitare l'adesione degli EB.
Sostituire il mezzo con un mezzo di differenziazione privo di inibitori.
Le cellule iniziano a migrare verso l'esterno dagli EB, formando un monostrato 2D.
Rimuovere il terreno e aggiungere un mezzo di maturazione cerebellare.
I fattori di crescita nel mezzo inducono la maturazione dei progenitori neuronali in distinti precursori neuronali cerebellari.
Il giorno zero
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