Generazione di neuroni e cellule gliali da corpi embrioidi derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:00 min. • July 8th, 2025
Prendiamo i corpi embrioidi, o EB, derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane. Questi EB sono composti da tre strati germinali.
Trasferire gli EB in una piastra di coltura rivestita di matrice contenente un terreno adatto e incubare.
La matrice consente agli EB di attaccarsi alla piastra di coltura.
I fattori di crescita e i nutrienti nel mezzo facilitano le cellule ectodermiche degli EB a formare aggregati neuroepiteliali disposti in uno schema circolare chiamato rosetta.
Tagliate i frammenti di rosetta e staccateli dal piatto.
Raccogli i frammenti e girali verso il basso.
Scartare il surnatante e risospendere i frammenti.
Usando una pipetta, muovi i frammenti su e giù per dissociarli.
Aggiungere il numero desiderato di cellule a una piastra a pozzetti rivestita di matrice contenente un mezzo di differenziazione.
I componenti del mezzo di differenziazione facilitano la trasformazione delle cellule neuroepiteliali in cellule neuronali e gliali completamente funzionali, le cellule primarie del sistema nervoso.
Il secondo giorno, aspirare la soluzione di rivestimento della matrice standard da un piatto da 60 millilitri precedentemente preparato e aggiungere 5 millilitri
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