JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:48 min. • July 8th, 2025
Inizia con frammenti di tessuto del tronco encefalico contenenti glioma pontino intrinseco diffuso, un tumore derivato da cellule progenitrici gliali in un ambiente ricco di nervi mielinizzati.
Trattare con enzimi proteolitici per degradare la matrice extracellulare del tessuto.
Dopo l'incubazione, pipettare ripetutamente il contenuto per facilitare la dissociazione cellulare e la degradazione della guaina mielinica.
Filtro e centrifuga per la raccolta delle cellule. Rimuovere il surnatante e risospenderli in un tampone freddo.
Aggiungere una soluzione di saccarosio per la separazione del gradiente di densità e mescolare accuratamente.
Successivamente, centrifugare per separare le cellule più pesanti dai detriti di mielina più leggeri.
Rimuovere lo strato di mielina e aggiungere un tampone di lisi dei globuli rossi.
Aggiungere un tampone freddo per arrestare l'azione di lisi. Centrifugare e rimuovere il surnatante per eliminare i globuli rossi lisati.
Risospendere le cellule in un mezzo neurobasale caldo e coltivarle in un pallone non rivestito.
L'assenza di fattori neurotropi provoca la morte neuronale, mentre le cellule progenitrici gliali utilizzano nutrienti e fattori di cresci
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