JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:34 min. • July 8th, 2025
Prendi il cucciolo di topo cerebella.
Omogeneizzali in frammenti più piccoli.
Aggiungere un enzima proteolitico per digerire la matrice extracellulare del tessuto, allentando i progenitori granulari cerebellari, o CGNP, e gli astrociti.
Aggiungere terreni di coltura CGNP contenenti siero per arrestare l'attività enzimatica. Centrifugare e scartare il surnatante ricco di enzimi.
Risospendere i frammenti di tessuto in terreno CGNP. Dissociare meccanicamente il tessuto per rilasciare le cellule.
Una volta che i detriti si sono depositati, trasferire il surnatante contenente le cellule in una nuova provetta.
Centrifugare e rimuovere il surnatante con i detriti.
Risospendere le cellule in terreno CGNP e seminarle su pozzetti a piastre multipozzetto rivestiti con poli-D-lisina. Incubare.
Gli astrociti si depositano e aderiscono fortemente al rivestimento di poli-D-lisina, rispetto ai CGNP.
Agitare la piastra e raccogliere il surnatante contenente CGNP. Centrifugare e rimuovere il surnatante.
Risospendere i CGNP in terreno CGNP e seminarli su una piastra multipozzetto rivestita di poli-L-ornitina. Incubare.
I CGNP si attaccano alla superficie rivestita e proliferano, aiutati dai component
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