JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:00 min. • July 8th, 2025
Iniziare con colonie di cellule staminali pluripotenti umane o hPSC attaccate a un substrato adatto in un terreno di coltura.
Rimuovere il mezzo. Aggiungere un mezzo neuronale contenente inibitori specifici e incubare.
Questi inibitori dirigono la maturazione delle hPSC verso una linea neuronale, formando colonie neuroectodermiche. Questi sono precursori di piccole strutture sferiche chiamate sferoidi.
Rimuovere il terreno e lavare con un tampone di sale.
Incubare con un enzima digestivo per staccare le colonie dalla piastra.
Aggiungere il mezzo neuronale per fermare l'attività enzimatica.
Raccogli le colonie e trasferiscile in un tubo.
Lasciali depositare, quindi scarta il surnatante.
Risospendere le colonie in un mezzo neuronale contenente un fattore di crescita.
Trasferire le colonie in una piastra a più pozzetti e incubare.
Questo fattore di crescita facilita l'auto-organizzazione e la moltiplicazione delle cellule neuroectodermiche, portandole a formare uno sferoide.
Per iniziare, piastrate le colonie di hPSC su una matrice di membrana basale qualificata hESC da un pozzetto di una piastra a 6 pozzetti alla confluenza del 60% in tre pozzetti per ottenere una densità dal 20% al
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici