JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:24 min. • July 8th, 2025
Prendi la retina di un ratto, uno strato dell'occhio sensibile alla luce contenente neuroni gangliari retinici, o RGN.
Metti la retina in una soluzione salina bilanciata a freddo per prevenire danni ai tessuti.
Trasferire la retina in una soluzione contenente proteasi e DNasi e tagliarla in pezzi più piccoli.
Trasferire il contenuto in una provetta e incubare.
La proteasi rompe la matrice extracellulare e allenta le cellule, mentre la DNasi degrada il DNA contaminante.
Pipettare su e giù per disperdere i grumi cellulari.
Aggiungere una soluzione inibitrice per fermare l'azione della proteasi.
Centrifugare le celle per sedimentarle. Rimuovere il surnatante e risospendere le cellule in un terreno di crescita adatto.
Aggiungere questa sospensione cellulare al monostrato di glia che riveste olfattivamente o cellule OEG, un tipo di cellula gliale, e incubare.
Gli RGN si integrano nel monostrato OEG, stabilendo il modello di cocoltura per valutare il potenziale neurorigenerativo degli OEG.
Posizionare la retina in una piastra di coltura cellulare P-60 precedentemente preparata con 5 millilitri di EBSS freddo. Quindi, trasferirlo in una piastra di coltura cellulare P-60 con papaina ricost
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