Un metodo per la generazione di terreno condizionato con oligodendrociti

0 views • 2:01 min • July 8th, 2025

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Prendi una capsula di Petri rivestita di polimero.

Aggiungere il lignaggio degli oligodendrociti o cellule OL a un terreno di coltura adatto e incubare.

La carica positiva sul rivestimento polimerico attrae la membrana cellulare caricata negativamente, migliorando l'adesione delle cellule alla capsula. I fattori di crescita e i nutrienti nel terreno facilitano l'espansione cellulare.

Sostituire il terreno con un terreno povero di sostanze nutritive e incubare.

Bassi livelli di nutrienti inducono un lieve stress nelle cellule, inducendole a secernere proteine, lipidi e altre molecole, inclusi fattori di crescita e citochine, nello spazio extracellulare.

Raccogli il mezzo in un tubo.

Il filtro sterilizza il mezzo per rimuovere i detriti cellulari e i componenti insolubili.

Il filtrato contenente le molecole bioattive solubili secrete dalle cellule OL è chiamato terreno condizionato con oligodendrociti o OCM.

Conservare l'OCM a temperature più basse fino a un ulteriore utilizzo per prevenire la degradazione di proteine e altre molecole, preservando così l'efficacia dell'OCM.

Piastra due o tre piastre di Petri pre-rivestite da 100 millimetri con 10 millilitri di sospensione cellulare.

Incubare in un incubatore umidificato a 37 gradi Celsius sotto il 5% di anidride carbonica.

In una cappa a flusso laminare in condizioni sterili, rinnovare il terreno di coltura con 10 millilitri di terreno caldo Mbb 27 basso.

Incubare per 2 giorni in un incubatore umidificato a 37 gradi Celsius sotto il 5% di anidride carbonica.

Per raccogliere l'OCM, raccogliere il surnatante contenente fattori secreti dagli oligodendrociti. Sterilizzare con filtro l'OCM utilizzando un filtro da 0,22 micron.

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Last updated: 27 June 2026