Un metodo per la generazione di terreno condizionato con oligodendrociti
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:01 min. • July 8th, 2025
Prendi una capsula di Petri rivestita di polimero.
Aggiungere il lignaggio degli oligodendrociti o cellule OL a un terreno di coltura adatto e incubare.
La carica positiva sul rivestimento polimerico attrae la membrana cellulare caricata negativamente, migliorando l'adesione delle cellule alla capsula. I fattori di crescita e i nutrienti nel terreno facilitano l'espansione cellulare.
Sostituire il terreno con un terreno povero di sostanze nutritive e incubare.
Bassi livelli di nutrienti inducono un lieve stress nelle cellule, inducendole a secernere proteine, lipidi e altre molecole, inclusi fattori di crescita e citochine, nello spazio extracellulare.
Raccogli il mezzo in un tubo.
Il filtro sterilizza il mezzo per rimuovere i detriti cellulari e i componenti insolubili.
Il filtrato contenente le molecole bioattive solubili secrete dalle cellule OL è chiamato terreno condizionato con oligodendrociti o OCM.
Conservare l'OCM a temperature più basse fino a un ulteriore utilizzo per prevenire la degradazione di proteine e altre molecole, preservando così l'efficacia dell'OCM.
Piastra due o tre piastre di Petri pre-rivestite da 100 millimetri con 10 millilitri di sospensione cellulare.
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