Isolamento e coltura di cellule precursori di oligodendrociti dalla corteccia cerebrale del cucciolo di topo

Prendi un cucciolo di corteccia di topo.

Aggiungere un enzima proteolitico che digerisce la matrice extracellulare del tessuto. Quindi, dissociare meccanicamente il tessuto, allentando le cellule.

Aggiungere terreni gliali e DNasi per degradare il DNA contaminante.

Dissociare meccanicamente il tessuto per rilasciare neuroni e cellule gliali.

Una volta che il tessuto non digerito si è depositato, raccogliere il terreno contenente le cellule e centrifugare. Rimuovere il surnatante.

Risospendere le cellule nei media gliali e piastarle su un pallone rivestito di proteine della matrice extracellulare.

incubare. Gli astrociti aderiscono più fortemente alla superficie rivestita rispetto ad altre cellule. I terreni gliali promuovono solo la sopravvivenza delle cellule gliali.

Sostituire il supporto per rimuovere i detriti.

Incubare con agitazione per staccare le cellule precursori degli oligodendrociti sovrastanti, le OPC e la microglia.

Trasferire il terreno con le cellule su una piastra di coltura.

Incubare agitando per facilitare l'adesione microgliale differenziale.

Trasferire il surnatante OPC non aderente su una piastra multipozzetto rivestita di poli-D-lisina. Incubare per l'aderenz