Una tecnica per generare organoidi cerebrali da cellule staminali embrionali umane

Prendiamo colonie di cellule staminali embrionali umane, o hESC, coltivate su una matrice di supporto.

Aspirare il terreno e aggiungere enzimi che degradano la matrice.

Lavare per eliminare gli enzimi. Quindi, aggiungi un terreno e una pipetta per rimuovere le colonie allentate, spezzandole in grappoli più piccoli.

Trasferire i grappoli in un terreno fresco e incubarli, permettendo ai grappoli di formare aggregati sferici.

Lascia che le sfere si depositino e rimuovi eventuali cellule morte.

Incubare con un terreno contenente il fattore di crescita basico dei fibroblasti, o bFGF, per la proliferazione cellulare.

Reintegrare con terreni contenenti concentrazioni di bFGF gradualmente decrescenti per facilitare la differenziazione cellulare.

Introdurre un mezzo di induzione neurale, che promuova la differenziazione delle hESC in cellule staminali neurali o NSC, trasformando le sfere in organoidi che esibiscono una struttura neurale simile a una rosetta.

Aggiungere antibiotici per prevenire la crescita di microbi contaminanti durante la coltura prolungata.

Le NSC si differenziano in neuroni e glia, sviluppando progressivamente gli organoidi in una struttura complessa simile a una cortec