JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 7:57 min. • July 8th, 2025
Prendi una topolina gravida transgenica e rimuovi chirurgicamente l'utero con embrioni contenenti motoneuroni marcati in fluorescenza.
Trasferisci l'utero in una piastra con un tampone ghiacciato al microscopio a fluorescenza.
Usa la luce visibile per isolare gli embrioni.
Rimuovere il viso e la coda degli embrioni e orientarli in posizione prona.
Utilizzando il segnale di fluorescenza, praticare un'incisione nel mesencefalo per esporre i nuclei oculomotorio e trocleare, che contengono motoneuroni.
Isolare il mesencefalo contenente i nuclei.
Aprire il lato dorsale del rombencefalo e del midollo spinale. Isolare il midollo spinale, asportare entrambe le estremità e raccogliere le colonne contenenti i motoneuroni spinali.
Trattare i tessuti raccolti con enzimi per dissociare la matrice tissutale. Raccogli le singole cellule e isola i neuroni marcati in fluorescenza utilizzando FACS.
Aggiungere un terreno di coltura ai neuroni isolati, trasferire le cellule su una micropiastra rivestita di substrato di coltura e incubare, consentendo alle cellule di aderire e crescere.
Mantenere i motoneuroni in coltura.
Inizia raccogliendo gli embrioni EGF-positivi dell'Islet-1 da un topo gravido cir
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