Manipolazione di colture di cellule staminali neuronali in un impianto di produzione cellulare

Per ridurre al minimo la contaminazione nelle colture di cellule staminali neuronali, utilizzare una struttura con una cappa laminare, una camera tampone, una camera di processo e una camera per microscopio, ciascuna separata da porte ermetiche.

Ora, riempi l'acqua in una piastra di coltura nell'incubatrice per mantenere l'umidità.

Regolare la camera tampone, la camera di processo e i parametri dell'incubatore a livelli ottimali.

Pulire tutte le superfici con un disinfettante e una garza sterile per eliminare i contaminanti microbici.

Posizionare prima la piastra di coltura di cellule staminali neuronali nella cappa laminare che fornisce aria filtrata.

Pulire l'esterno della piastra con una garza imbevuta di etanolo e quindi trasferirla nella camera tampone che fornisce aria filtrata con livelli di gas ottimali.

Infine, spostare la piastra attraverso la camera di processo nell'incubatore e chiudere lo sportello.

Dopo l'incubazione, spostare nuovamente la piastra di coltura nella camera di processo insieme a un terreno fresco.

Equilibrare il mezzo fresco.

Rinfrescare il terreno nella piastra di coltura e incubare nuovamente la piastra.

Metti tre piastre di Petri nella vaschetta dell'acqua alla base di ogni incubatrice. Riempi queste piastre con acqua sterile e mantieni il livello dell'acqua in queste piastre poiché sono fondamentali per mantenere il set point di umidità relativa nell'incubatrice.

All'interno dell'interfaccia grafica, fai clic su Incubatore. Successivamente, fare clic sul valore esistente per l'umidità relativa al di sotto del setpoint e inserire 85%. Quindi, fai clic sul segno di spunta verde per accettare questo valore.

Quindi, regolare le camere tampone, la camera di processo e un incubatore in base ai punti di impostazione del gas necessari per il tipo di celle da introdurre. Pulire la superficie della camera di processo con una garza sterile e un disinfettante non infiammabile, come i prodotti a base di benzalconio cloruro.

Quindi, pulisci i guanti e le superfici che vengono comunemente toccate, come le maniglie delle porte. Successivamente, pulire la superficie della cappa a flusso laminare e della camera tampone con etanolo al 70% e lasciarla asciugare.

Successivamente, posizionare il pallone o la piastra di cellule nel cappuccio e pulire brevemente la superficie esterna con una spugna di garza sterile imbevuta di etanolo. Quindi, mettere il pallone o la piastra nella camera tampone ed eseguire un fattore di diluizione. Al termine, trasferire immediatamente il pallone o la piastra nell'incubatrice appropriata.

Poiché l'incubatore si trova nella parte posteriore della camera di processo, estrarre un ripiano nella camera di processo per il posizionamento delle celle ed evitare di aprire le porte dell'incubatore inutilmente o per lunghi periodi di tempo.

In questa fase, preparare il terreno di coltura cellulare. Lasciare che il fluido si equilibri con i livelli di anidride carbonica e ossigeno presenti all'interno del sistema lasciando il contenitore del terreno leggermente aperto per 20 minuti.

Successivamente, rimuovi il vecchio terreno dai pozzetti. Per le cellule staminali pluripotenti, rimuovere quasi tutto il vecchio terreno con una piccola quantità di vecchio terreno rimanente, per evitare l'essiccazione durante il processo di alimentazione. Per le cellule staminali neurali, rimuovere metà del vecchio terreno. Quindi, aggiungere un terreno fresco alle piastre per colture cellulari e riposizionare le piastre nell'incubatore designato.