Purificazione di cellule precursori endoteliali CD31+ mediante smistamento cellulare attivato da magneti
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 5:32 min. • July 8th, 2025
Prelevare una coltura aderente di cellule progenitrici endoteliali o EPC, precursori delle cellule endoteliali microvascolari cerebrali.
La coltura, ottenuta differenziando cellule staminali pluripotenti, comprende EPC positive per il marcatore di superficie CD31 e cellule CD31-negative contaminanti.
Incubare con un reagente di dissociazione per staccare le cellule e filtrare per ottenere una sospensione a cellula singola.
Aggiungere un terreno per neutralizzare gli enzimi, centrifugare per scartare il surnatante e risospendere le cellule in un tampone.
Incubare con un reagente bloccante per inibire i recettori Fc cellulari, impedendo la marcatura non specifica.
Aggiungere un anticorpo coniugato con fluorofori specifico per CD31 e incubare per marcare le EPC.
Centrifugare e scartare gli anticorpi non legati. Incubare con complessi anticorpali contenenti un anticorpo che si lega ai fluorofori.
Introdurre nanoparticelle magnetiche rivestite di polimero e incubare, consentendo alle nanoparticelle di legarsi al secondo anticorpo dei complessi.
Utilizzando un campo magnetico, isolare le cellule legate alle nanoparticelle.
Eliminare la sospensione con cellule CD31-negative non marcate e
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