JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 6:24 min. • July 8th, 2025
Iniziamo con le neurosfere non aderenti, un aggregato tridimensionale di cellule staminali neurali umane in un mezzo condizionato derivato da colture cellulari.
Questo terreno contiene sostanze nutritive, fattori di crescita e componenti della matrice extracellulare che mantengono la vitalità cellulare.
Centrifuga per raccogliere le neurosfere.
Trattali con tripsina ed enzimi DNasi, mescola il contenuto e poi incubali.
La tripsina interrompe l'adesione cellula-cellula e facilita il distacco cellulare, mentre la DNasi degrada il DNA libero per prevenire l'aggregazione cellulare.
Pipettare ripetutamente il contenuto per formare una sospensione unicellulare. Quindi, aggiungi un inibitore della tripsina per neutralizzare l'attività enzimatica.
Centrifugare e rimuovere il surnatante, quindi risospendere le cellule in un mezzo di proliferazione contenente fattori di crescita neurali.
Seminare la sospensione cellulare su un vetrino coprioggetti rivestito di polimero posto in una piastra a più pozzetti. Incubare per consentire l'adesione delle cellule staminali al polimero.
Inoltre, in base all'assorbimento di specifici fattori di crescita, le cellule staminali si differenziano in progenit
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