Generazione di organoidi cerebrali di tipo proencefalico da cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo

Iniziare con una piastra a pozzetti a basso attaccamento contenente cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo o iPSC in un mezzo di cellule staminali integrato con un inibitore della Rho-chinasi.

Gli inibitori entrano nelle cellule, bloccano gli enzimi Rho-chinasi e mantengono la vitalità cellulare. Questo favorisce la formazione di aggregati iPSC.

Sostituire il terreno con un terreno di coltura a base di cellule staminali per consentire la crescita degli aggregati. Trasferiscili in un piatto di coltura a basso attaccamento con un terreno di induzione corticale.

I componenti di questo mezzo fanno sì che le iPSC si differenzino in cellule neuroectodermiche, un precursore neurale.

Trasferire ogni aggregato neuroectodermico su una pellicola con pozzetti poco profondi.

Sostituire il terreno con una matrice a membrana basale e incubare per consentire la solidificazione della matrice e l'intrappolamento degli aggregati.

Trasferire questi aggregati incorporati nella matrice in una piastra contenente un mezzo di induzione corticale e incubare con agitazione.

Nel tempo, le cellule neuroectodermiche utilizzano i fattori di differenziazione e si sviluppano in cellule neuroepiteliali.

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