Formazione ed espansione di neurosfere da un tessuto ippocampale

Inizia con un giro dentato dell'ippocampo di topo postnatale, un tessuto cerebrale ricco di cellule staminali neurali e progenitrici con capacità di autorinnovamento.

Aggiungere enzimi tripsina che dissociano la matrice extracellulare del tessuto, allentando le cellule.

Quindi, rimuovere gli enzimi e lavare ripetutamente il tessuto con un tampone.

Sostituire il tampone con un terreno di coltura neuronale arricchito con fattori di crescita.

Pipettare ripetutamente per dissociare il tessuto e rilasciare le cellule nel terreno.

Seminare la sospensione cellulare diluita in una capsula di Petri non rivestita e incubare.

Le cellule staminali e progenitrici utilizzano nutrienti e fattori di crescita per proliferare.

Nel corso del tempo, si aggregano spontaneamente, formando strutture tridimensionali fluttuanti denominate neurosfere primarie con una popolazione cellulare eterogenea.

Raccogli queste neurosfere e scarta il surnatante. Risospendere le neurosfere in un mezzo di coltura neuronale e dissociarle in una sospensione a singola cellula.

Ri-coltura di queste cellule in una capsula di Petri non rivestita per formare neurosfere secondarie con una popolazione cellulare relativamente omog